Сравнительный анализ методов экстракции общей геномной ДНК голубики высокорослой.

Н.В. Водчиц (Vodchits N.V.); И.О. Зайцева (Zaitseva I.О.); И.Г. Кирикович (Kirikovich I.G.); Е.О. Юрченко (YurchenkoE.O.); А.А. Волотович (Volotovich A.A.)

Авторы

Н.В. Водчиц (Vodchits N.V.)
И.О. Зайцева (Zaitseva I.О.)
И.Г. Кирикович (Kirikovich I.G.)
Е.О. Юрченко (YurchenkoE.O.)
А.А. Волотович (Volotovich A.A.)

Аннотация

Апробированы два протокола экстракции ДНК для растительных тканей с повышенным содержанием ингибиторов ПЦР (Li et al., 2007, с модификациями; Dempster et al., 1999, с модификациями) применительно к листьям и стеблям Vaccinium corymbosum. Оба протокола основаны на термическом лизисе тканей с использованием ЦТАБ, ЭДТА, NaCl, меркаптоэтанола, ПВП. В первом протоколе применяется экстракция фенолом, хлороформом и изоамиловым спиртом и осаждение ДНК этанолом. Во втором применяется экстракция хлороформом и изоамиловым спиртом и осаждение ДНК изопропанолом. Второй протокол позволил получить ДНК высокой степени очистки, дающей достаточный продукт приISSR–ПЦР. = Two protocols of DNA extraction from Vaccinium corymbosumleaves and stems (according to Li et al., 2007, with modifications; according to Dempster et al., 1999, with modifications) were tested. Both protocols were designed for application to the tissues with high contents of PCR inhibitors and based on thermal lysis in buffer containing CTAB, EDTA, NaCl, 2–mercaptoethanol and PVP. The first protocol includes extraction by phenol, chloroform and isoamyl alcohol, and DNA precipitation by ethanol. The second includes extraction by chloroform and isoamyl alcohol, and DNA precipitation by isopropanol. DNA extracts obtained by the second protocol were ofhigh purity and provided enough products in ISSR–PCR.

Библиографические ссылки

Рупасова, Ж.А. Фиторекультивация выбывших из промышленной эксплуатации торфяных месторождений севера Беларуси на основе возделывания ягодных растений семейства Ericaceae / Ж.А. Рупасова, А.П. Яковлев, В.Н. Решетников. – Минск, 2011. – 282 с.

Спиридович, Е.В. Молекулярные маркеры в таксономии и сохранении генетических ресурсов голубики высокой (Vaccinium corymbosum L.) / Е.В. Спиридович, А.Б. Власова, А.Н. Юхимук, Л.В. Гончарова, Е.Д. Агабалаева, Е.Н. Решетников // Опыт и перспективы возделывания голубики на территории Беларуси и сопредельных стран: Мат–лы междунар. науч.–практ. конф. Минск, 17–18 июля 2014 г. / Центр. бот. сад НАН Беларуси; редкол.: В.В. Титок (отв. ред.) [и др.]. – Минск, 2014. – С.101– 108.

Рупасова, Ж.А. Сравнительная оценка биохимического состава плодов перспективных сортов голубики высокорослой в условиях Беларуси / Ж.А. Рупасова, В.Н. Решетников, Н.Б. Павловский, А.П. Яковлев, А.М. Бубнова // Голубиководство в Беларуси: итоги и перспективы: Мат–лы Респ. науч.–практ. конф. Минск, 17 августа 2012 г. / Центр. бот. сад НАН Беларуси; редкол.: В.В. Титок (отв. ред.) [и др.]. – Минск, 2012. – С.62– 66.

Калаев, В.Н. Разработка метода получения препарата суммарной ДНК высокого качества из растений рода Rhododendron / В.Н. Калаев, О.А. Землянухина, И.Ю. Карпеченко, К.А. Карпеченко, А.М. Кондратьева, В.Н. Вепринцев, Н.А. Карпеченко, С.С. Карпова // Фундаментальные исследования. – 2012. – № 5. – С. 148–152.

Юрченко, Е.О. Основы молекулярного маркирования грибной ДНК: Практическое руководство / Е.О. Юрченко, М.Г. Синявская; Ин–т эксперим. ботаники НАН Беларуси. – Минск: Право и экономика, 2007. – 101 с.

Li, J.T. An optimized mini–preparation method to obtain high–quality genomic DNA from mature leaves of sunflower / J.T. Li, J. Yang, D.C. Chen, X.L. Zhangand, Z.S. Tang // Gen. Mol. Res. – 2007. – Vol. 6. – P. 1064–1071.

Dempster, E.L. Rapid DNA extraction from ferns for PCR–based analyses / E.L. Dempster, K.V. Pryor, D. Francis, J.E. Young, H.J. Rogers // Biotechnique. – 1999. – Vol. 27, No. 1. – P. 66–68.

Рябушкина, Н.А. Специфика выделения ДНК из растительных объектов / Н.А. Рябушкина, М.Е. Омашева, Н.Н. Галиакпаров // Биотехнология. Теория и практика. – 2012. – № 2. – С. 9–26.

Верниковская, Н.А. Идентификация и хроматографическое определение фенольных соединений в тысячелистнике обыкновенном / Н.А. Верниковская, З.А. Темердашев // Аналитика и контроль. – 2012. – Т. 16, № 2. – С. 188–195.

Медведев, Ю.В. Исследование содержания фенолокислот в лекарственном и пищевом растительном сырье методом ВЭЖХ : дисс. … канд. фармац. наук: 14.04.02 / Ю.В. Медведев. – М., 2010. – 143 с.