Подбор условий проведения ISSR– пцр для сортовой голубики высокорослой (Vaccinium corymbosum).

Н.В. (Vodchits N.V.) Водчиц; Е.О. (Yurchenko E.O.) Юрченко; А.А. (Volotovich A.A.) Волотович

Authors

Н.В. (Vodchits N.V.) Водчиц
Е.О. (Yurchenko E.O.) Юрченко
А.А. (Volotovich A.A.) Волотович

Abstract

Экспериментально оценивалось влияние трех переменных факторов в составе ПЦР–смеси при ISSR–маркировании растений с праймером UBC 818: молярной концентрации MgCI2, молярной концентрации дНТФ и массовой концентрации ДНК–матрицы. Установлены следующие оптимальные значения, дающие как достаточное число различных ISSR–aрагментов, так и достаточное количество копий каждого фрагмента, при общем реакционном объеме 25 мкл: 2‒2.5 мМ MgCI2, 125 мкМ смеси дНТФ (1 : 1 : 1 : 1), 10‒20 нг ДНК. Ключевые слова: Vaccinium сorymbosum L., ISSR-ПЦР, сорта, MgCI2, дНТФ, ДНК, ПЦР-продукт. = In the experiments, the effect of three variable factors in PCR mixture was assessed: concentration of MgCI2, concentration of dNTP, and the amount of DNA template. The mixture was used for ISSR profiling of plants with primer UBC 818. The optimum parameters of PCR mixture were stated taking into account the higher number of ISSR fragments and sufficient amount of copies of each fragment. These parameters were (per 25 μl of mixture): 2‒2.5 mM MgCI2, 125 μМ dNTP mix (1 : 1 : 1 : 1), 10‒20 ng of DNA template. Key words: Vaccinium сorymbosum L., ISSR-PCR, cultivars, MgCI2, dNTP, DNA, PCR- product.

References

Власова, А.Б. Сертификация сортов голубики высокой (Vaccinium corimbosum L.), районированных в Беларуси, на основе RAPD– и ISSR–маркеров / А.Б. Власова, А.Н. Юхимук, Е.В. Спиридович, В.Н. Решетников // Вісн. Укр. тов–ва генетиків і селекціонерів. – 2010. – Т. 8, № 2. – С. 203– 210.

Агабалаева, Е.Д. Проведение молекулярно–генетического анализа растений рода Trigonella с использованием RAPD– и ISSR–маркеров / Е.Д. Агабалаева, Е.В. Спиридович, И.Я. Нам // Овощеводство

будущего: новые знания и идеи: Мат–лы Междунар. науч.–практ. конф. мол. ученых, посв. 125–летию со дня рождения Н.И. Вавилова. Москва, 16 августа 2012 г. / ГНУ Всерос. НИИ овощеводства Рос. акад. с.–х. наук; под ред. Р.А. Мещерякова. ‒ М., 2012. ‒ С. 33‒36.

Киль, В.И. ДНК–полиморфизм популяций хлопковой совки и картофельной минирующей моли по ISSR–маркерам / В.И. Киль, Е.Н. Беседина // Биологическая защита растений – основа стабилизации агроэкосистем: Мат–лы Междунар. научн.–практ. конф. Вып. 5. Краснодар, 23‒25 сент. 2008 г. ‒ Краснодар, 2008. – С. 415‒420.

Хапилина, О.Н. Молекулярно–генетическая идентификация сортов мягкой пшеницы с использованием ретротранспозонов / О.Н. Хапилина, О.Б. Райзер // Биотехнология. Теория и практика. – 2013. – № 4. – С. 29–35.

Dempster, E.L. Rapid DNA extraction from ferns for PCR–based analyses / K.V. Pryor, D. Francis, J.E. Young, H.J. Rogers // Biotechnique. ‒ 1999. – Vol. 27, No. 1. – P. 66–68.

Воропаева, А.Л. Алгоритм определения аллельных вариантов и генотипов Helicobacter pylori с использованием полимеразной цепной реакции: Инструкция по применению / А.Л. Воропаева, Е.В. Воропаев, О.Ю. Баранов [и др.]. ‒ Гомель, 2008. ‒ C. 36.

Юрченко, Е.О. Основы молекулярного маркирования грибной ДНК: Практическое руководство / Е.О. Юрченко, М.Г. Синявская; Ин–т эксперим. ботаники НАН Беларуси. – Минск: Право и экономика,

– 101 с.